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品质保证 · 通蔚试剂
021-54845833/15800441009品质保证 · 通蔚试剂
发布时间：2024-03-27 发布作者：通蔚生物
免疫测定是使用抗体来检测和测量生物样本（例如血液、尿液或唾液）中的各种物质的实验室测试。它通常用于临床诊断、药物发现和基础研究，以检测激素、药物、蛋白质和传染源等。一些最常用的免疫测定法包括酶联免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)、荧光免疫测定法(FIA)和化学发光免疫测定法(CLIA)。
图1、ELISA实验
免疫分析技术已广泛应用于药物分析的各个关键领域，例如疾病诊断、治疗药物监测、临床药代动力学研究以及药物发现和制药行业的生物等效性研究。
放射免疫测定（RIA）是一种使用放射性标记抗原来测量体液中物质浓度的技术。放射性同位素附着在抗原上并与其互补抗体结合。具有目标抗原的样品与放射性抗原竞争并取代它。测量样品的放射性信号，其强度与目标抗原浓度成正比。 RIA 需要含有抗原、互补抗体和放射性标记抗原的样品。
免疫测定依赖于与一种免疫分析试剂（例如分析物或抗体）连接的可检测标记，例如放射性同位素或酶。这些标记在免疫测定中的结合导致了检测限非常低的高灵敏度检测系统的开发。
图 2 包括 (A) 与一抗孵育的样品肽。 (B) 然后添加放射性标记的肽。它与样品肽竞争并取代它。 (C) 二抗与一抗结合并使其从溶液中沉淀出来。 (D) 离心导致抗体-抗原复合物形成沉淀。 (F) 典型标准曲线示例。 (G) 尾加压素-II (UII) 的实际标准曲线，其中结合的放射性碘量表示为 B/B0，它是每个标准浓度下的结合量 B 与不存在置换剂时的结合量 B0 的比率。生物样本中的分析样品应位于曲线的直线部分。
优点：
1、高灵敏度和特异性，可准确检测和定量复杂生物样品中低水平的目标分子
2、适用于多种分析物，包括激素、药物和传染源。
缺点：
1、使用需要特殊处理和处置程序的放射性物质。
2、专业设备和技术专长会导致更高的成本和时间消耗。
3、被其他更安全、更易于使用的免疫测定技术所取代。
与ELISA比较
1、RIA 使用放射性标记，而 ELISA 使用酶标记。
2、RIA 更灵敏，但需要特殊处理且更昂贵，而 ELISA 更安全、更快速且更具成本效益。
3、RIA 更适合检测复杂生物液体中的低水平抗原或抗体，而 ELISA 更适合快速检测大量样品。
4、检测方法的选择取决于实验的具体需求，例如灵敏度、成本和安全性。
FIA 是一种使用荧光化合物来检测和测量不同化合物的技术。与其他方法相比，它具有高度灵敏和快速的特点，使其成为体外诊断领域的热门选择。
在 FIA 中，荧光探针用于标记抗体，抗体在紫外线下发光以检测特定的抗原抗体结合。然后分离抗原-抗体复合物并测量荧光强度。
进行了一项研究，使用三种竞争性测定法降低食品中酪蛋白的检测限：直接和间接 TR-FIA 以及 ELISA。两种 TR-FIA 的灵敏度均远低于 ELISA。然而，所有三种测定方法都可以对食品中的酪蛋白进行 1-1.5 mg kg?1的定量，为更严格的验证和协作测试提供了基础。 TR-FIA 方法没有比 ELISA 提供任何改进。
优点：
1、快速且高度灵敏地检测和定量化合物
2、使用特异且高灵敏度的荧光化合物作为检测试剂
3、可用于不同的环境，包括体外诊断
缺点：
1、需要专门的荧光检测设备
2、与其他方法相比，检测动态范围有限
3、样品基质和自发荧光可能会产生干扰。
与ELISA比较
使用 TRFIA（时间分辨荧光免疫分析）和Eu3+ 螯合物标记的单克隆抗体检测环境水中的痕量磺胺类药物。该方法具有低检测限和高选择性，并且能够耐受pH、盐度和其他物质存在的变化。 TRFIA 具有成本效益、样品通量高、无需预处理即可使用。研究表明，TRFIA 是一种很有前景的环境水中磺胺类药物常规筛查方法，与现有方法相比具有优势。
CLIA 使用化学反应来产生光并检测目标分子的存在。将特定抗原或抗体固定在固体支持物上，然后添加化学发光底物以及与目标分子结合的二抗。
基于磁珠的 CLIA 是一种变体，它使用涂有特定抗原或抗体的磁珠，这些磁珠通过磁性纳米粒子进行功能化，可以有效地将目标分子从样品中分离出来。
用于检测寨卡病毒的磁驱动化学发光检测使用带有针对该病毒的特异性抗体功能化的磁珠，将其置于磁场中以提高检测的灵敏度。
化学发光免疫分析 (CLIA) 的优点包括：
1、高灵敏度和特异性：CLIA可以检测极低浓度的目标分子，假阳性和假阴性率低。
2、宽动态范围：CLIA 可以测量目标分子的各种浓度，从非常低到非常高。
3、灵活性：CLIA可用于检测多种不同的靶分子，包括蛋白质、核酸和小分子。
4、自动化：CLIA 可以轻松实现自动化，使其成为一种方便高效的高通量分析技术。
5、稳定性：与其他免疫测定技术相比，CLIA 产生的化学发光信号稳定，可以在更长的时间内进行测量。
化学发光免疫分析 (CLIA) 的缺点包括：
1、成本：CLIA 试剂和仪器可能很昂贵，这可能会限制它们在某些应用中的使用。
2、复杂性：CLIA 需要专门的设备和专业知识，这使得在一些实验室中难以实施。
与ELISA比较
这两种免疫测定法已证明其分析具有一致性，但定量结果存在差异，这可能归因于使用不同的标准校准品。尽管 CLIA 测试显示所获得的值波动较大，但它是有益的，因为它是一个自动化过程，并且等待时间短。因此，两种免疫测定可以互换使用，以精确测定样品中的抗 HBs 水平。
结论
总之，ELISA 是一种经济有效且广泛使用的方法，但在敏感性和特异性方面可能存在局限性。 RIA 灵敏度高，但价格较高，并且由于使用放射性同位素而带来安全问题。 CLIA 高度灵敏、特异、自动化且周转时间短，使其成为临床实验室的热门选择。