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021-54845833/15800441009
产品及特点
本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有牛亚科动物和羊亚科动物的成分。现代食品加工工艺极大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。此外还有很多情况需要检测非食品样本中是否有牛亚科动物和羊亚科动物源性成分。本产品就是为满足这些需求根据PCR原理开发的产品，它具有下列特点：
本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有牛亚科动物和羊亚科动物的成分。现代食品加工工艺极大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。此外还有很多情况需要检测非食品样本中是否有牛亚科动物和羊亚科动物源性成分。本产品就是为满足这些需求根据PCR原理开发的产品，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏度高，可以达到100拷贝/反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据小麦蜜穗病菌DNA高度保守区设计，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。定量检测时线性范围至少为5个数量级。
6. 本产品足够50次20 μL体系的探针法qPCR反应。
7. 本产品只能用于科研。
规格及成分
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成分 |
规格 |
包装 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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荧光PCR专用模板稀释液 |
1mL |
1.5mL绿盖管 |
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牛亚科和羊亚科动物源性成分双重qPCR引物-探针干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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牛亚科动物源性成分PCR阳性对照(1E7拷贝/μL) |
50μL |
0.5mL黄盖管 |
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羊亚科动物源性成分PCR阳性对照(1E7拷贝/μL) |
50μL |
0.5mL白盖管 |
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使用手册 |
1份 |
无 |
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本产品采用五孔盒包装 |
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注 意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入220 mL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀释牛亚科动物源性成分检测标准曲线样品以阳性对照1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。
稀释牛亚科动物源性成分检测标准曲线样品以阳性对照1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。
1. 标记6个离心管，分别为A6、A5、A4、A3、A2、A1。
2. 在A1-A6号管中各加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液。
3. 在A6号管中加入5 μL 1E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1E6拷贝/μL的标准曲线PC样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在A5号管中加入5 μL 1E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在A4号管中加入5 μL 1E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作得到A1-A6共六个稀释度的标准曲线阳性样品。放冰上待用。
稀释羊亚科动物源性成分检测标准曲线样品
7. 操作同上，只是使用羊亚科动物源性成分的PC作为模板。得到6个浓度的样本放冰上待用，分别是B1-B6。
样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，设置N+3个提�。喑龅囊桓鍪桥Ｑ强贫镌葱猿煞值腜C（牛样品制备阳性对照），一个是羊亚科动物源性成分的PC（羊样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用确认是牛亚科动物的材料作为牛PC，可以用确认是羊亚科动物的材料作为羊PC，用确认是非牛亚科动物和非羊亚科动物的材料（或水）为NC。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
Probe qPCR反应20 μL体系，在样品制备室进行
10. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+3+1+6+6个PCR管，其中N+3个用于上步得到的N+3个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于牛亚科动物源性成分的标准曲线，另外6个用于羊亚科动物源性成分的标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+3+3个PCR管，其中N+3个用于上步得到的N+3个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于牛亚科动物源性成分PCR阳性对照，1个用于羊亚科动物源性成分PCR阳性对照（直接用第一步和第二步所得的两个4号稀释液分别作为模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
数据处理
1. 如果扩增阳性对照或制备阳性对照结果为阴性，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要重做扩增或制备或跟厂家联系。如果扩增阴性对照或制备阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系，购买新的引物和探针。
2. 如果阴性对照和阳性对照正常，则实验有效，可以进入后续分析。
3. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，分别以阳性对照（FAM通道）和（Cy5通道）的Ct值为纵轴，绘制标准曲线，阳性对照的标准曲线为斜线，r2必须大于0.95。再以待测样品的Ct值从阳性对照的标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
4. 对定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照的Ct必须大于40，或者没有Ct值。阳性对照的荧光信号必须有对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40。对待测样品，如果其FAM通道的Ct大于40则为牛亚科源动物性成分阴性，如果小于或等于40则为牛亚科动物源性成分阳性。如果其Cy5通道的Ct大于40则为羊亚科动物源性成分阴性，如果小于或等于40则为羊亚科源动物性成分阳性。
自备试剂
超纯水，样品DNA
超纯水，样品DNA
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年
低温运输，-20℃保存，有效期1年
