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邻苯二甲酸二甲酯(DMP)ELISA试剂盒
简介
邻苯二甲酸二甲酯（DMP）作为一种常见的邻苯二甲酸酯类化合物，普遍存在于环境中（聚氯乙烯塑料释放的主要添加剂）。DMP诱导的抗氧化应激增强了接合转移。与许多其他有毒物质类似，DM也会引发细胞ROS的产生，破坏细胞膜的完整性，从而间接影响其通透性。邻苯二甲酸二甲酯通过模仿或干扰激素信号，破坏内分泌系统的正常功能。研究表明，DMP能够充当“抗雄激素”，抑制睾酮的正常功能，从而影响生殖系统的发育和功能。此外，DMP还被发现能够干扰甲状腺、性激素和25-羟基维生素D的水平，导致甲状腺功能紊乱、性早熟等问题。本酶联免疫检测试剂盒可以经济、快速地检测样品中的DMP的残留量。
检测原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中DMP和微孔条上预包被的偶联抗原竞争DMP抗体，加入酶标二抗后，形成包被抗原-抗体-酶标二抗复合物。随后结合的酶催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的DMP成负相关。通过标准曲线可准确定量样品中DMP的含量。通过标准曲线计算所得值乘以样品处理的稀释倍数即为实际样品中DMP的含量。
需要的其他材料
1. 酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；
2. 移液器及枪头；
3. 蒸馏水或去离子水；
4. 100-1000mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；
6. 水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀释标准品和样品的试管。
试剂准备
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配置
如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热?晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）
标准品配置
试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先将100ppm标准品（200?L）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至1920ppb（例：19.2?L的标准品母液+983.2?L的1×稀释液，制备得到1000μL的1920ppb浓度标准品），随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液，在这6个单独的试管中将1920 ppb标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度，共配制7个浓度的标准品，依次为：1920ppb、960ppb、480ppb、240ppb、120ppb、60ppb、30ppb，从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0ppb)。
一抗工作液配置
使用前10分钟，用1×稀释液将100×一抗工作液稀释成1×一抗工作液，根据所需用量配置。
酶标二抗工作液配置
使用前10分钟，用1×稀释液将100×酶标二抗稀释成1×酶标抗体工作液，根据所需用量配置。
备 注：如样本中待测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数 (建议：将待测样本用样品稀释液最低稀释1倍，在正式实验之前做预实验，以确定具体稀释倍数) ；标准品母液及100×酶标二抗溶液根据实验所需酶标板孔数吸取一定量配制工作液，剩余溶液应放回-20℃储存，且避免反复冻融。（若实验在1-2周内做完，标准品母液及100×酶标抗体置于2-8℃保存；若实验为长时间跨度实验，建议将标准品母液及100×酶标抗体置于-20℃保存，以保证实验结果的稳定性）
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
精密度
批内精密度 ：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。
批内变异系数 CV%小于10%。
批间精密度 ：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。
批间变异系数 CV%小于15%。
回收率
样本回收率：80% - 120%
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为30 ppb。
线性关系
校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.998。
本ELISA试剂盒实验计算和曲线图，请您下载产品说明书(供参考），本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断和治疗。
