简介

胆囊收缩素(CCK)是胃肠系统的一种肽类激素，负责刺激脂肪和蛋白质的消化。胆囊收缩素，正式名称为胰岛素，由十二指肠（小肠的第一段）的肠内分泌细胞合成和分泌。它的存在导致消化酶和胆汁分别从胰腺和胆囊中释放出来，同时也起到抑制饥饿的作用。它是胃泌素/胆囊收缩素系列多肽激素的成员，在结构上与另一种胃肠道激素胃泌素非常相似。CCK 和胃泌素有相同的五个 C 端氨基酸。CCK 由不同数量的氨基酸组成，取决于 150 个氨基酸前体的翻译后修饰，即前囊素。因此，CCK 多肽激素以多种形式存在，每种形式以其包含的氨基酸数量来识别，如 CCK58、CCK33、CCK22 和 CCK8。 CCK58 呈螺旋-转折-螺旋构型。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物CCK8，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中CCK8的浓度。

需要的其他材料

1. 酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；

2. 移液器及枪头；

3. 蒸馏水或去离子水；

4. 100-1000 mL刻度量筒；

5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；

6. 水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度；

7. 用于稀释标准品和样品的试管。

样品保存

样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

试剂准备工作

使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。

洗涤液/稀释液配置

如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热?晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）

标准品配置

试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先从20ng/mL标准品（200μL）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至1000pg/mL（例：50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液，制备得到1000μL的1000pg/mL浓度标准品），随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液，在这6个单独的试管中将1000pg/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度，共配制7个浓度的标准品，依次为: 1000pg/mL、 500pg/mL、 250pg/mL、 125pg/mL、 62.5pg/mL、 31.25pg/mL、 15.63pg/mL，从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0pg/mL)。

豚鼠(CCK8)ELISA试剂盒

抗体工作液配置

使用前10分钟，将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液，根据所需用量当日配置当日使用。

酶结合物工作液配置
使用前10分钟，将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液，根据所需用量配置。

备注：如待测样本中CCK8浓度高于标准品最高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数。

结果的计算

计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。

若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。

示例数据

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

标准品浓度(pg/mL)	1000	500	250	125	62.5	31.25	15.63	0
OD值	2.400	1.678	1.051	0.639	0.353	0.238	0.179	0.067
校正OD值	2.333	1.611	0.984	0.572	0.286	0.171	0.112	0

下图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果

重复性

板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%。

灵敏度

经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为7.82pg/mL。

特异性

该试剂盒测定可识别重组豚鼠CCK8。

其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。
使用ELISA试剂盒之前，请您必须完整阅读说明书，本产品仅供科研使用，不能于临床诊断或治疗。

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豚鼠胆囊收缩素八肽(CCK8)ELISA试剂盒说明书
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