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猪轮状病毒探针法RT-LAMP试剂盒
产品及特点
猪轮状病毒 (Porcine Rotavirus, PRV)是猪群中常见的引起腹泻性疾病的主要病原。 幼龄仔猪易感，1～4 周龄仔猪发 病率超过 80%，死亡率达 7% ～20%，症状也较严重。同时，由于该病常与其他疾病混合感染，使病情加重，导致死亡率增高，给养殖户带来严重的经济损失。因此PRV的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此，本公司开发了本检测试剂盒，它具有下列特点：
产品及特点
猪轮状病毒 (Porcine Rotavirus, PRV)是猪群中常见的引起腹泻性疾病的主要病原。 幼龄仔猪易感，1～4 周龄仔猪发 病率超过 80%，死亡率达 7% ～20%，症状也较严重。同时，由于该病常与其他疾病混合感染，使病情加重，导致死亡率增高，给养殖户带来严重的经济损失。因此PRV的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此，本公司开发了本检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒RNA样品。
2. 恒温扩增，可以不需要贵重的荧光PCR等贵重仪器。
3. 含探针，可以进一步提高专一性。
4. 检测灵敏性可以达到100拷贝/反应左右。
5. 特异性高，扩增引物和检测探针均根据猪轮状病毒RNA保守序列设计，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
6. 一般30分钟内出结果，比RT-PCR快。
7. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
8. 提供内参，便于识别假阴性。
9. 本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
10. 上样量大，对20 μL的反应体系，样品加样量高达到13μL。
11. 内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
12. 本产品足够50次20 μL体系的探针法荧光RT-LAMP扩增。
13. 只可用于科研。
规格及成分
规格及成分
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成分 |
规格 |
包装 |
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RT-LAMP MasterMix（探针法，待加酶） |
200μL |
0.5mL本色盖 |
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逆转录酶-扩增酶混合液 |
100μL |
0.5mL红盖管 |
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20×猪轮状病毒RT-LAMP引物探针混合液干粉 |
50次 |
0.5mL白色管 |
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猪轮状病毒RT-LAMP阳性对照 |
2.5×10E6拷贝 |
0.5mL黄盖管 |
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猪轮状病毒RT-LAMP内参 |
5×10E6拷贝 |
0.5mL绿盖管 |
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使用手册 |
1份 |
无 |
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本产品采购五孔盒包装 |
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注 意：首次使用本产品的时候，需要在引物探针混合液干粉管中加入60uL的自备超纯水，在阳性对照管和内参管中分别加入250uL和500uL超纯水，使得阳性对照和内参的浓度均为1×10E4拷贝/μL。这些溶液用后还有剩余的需要放-20℃保存，阳性对照和内参由于是高浓度的模板，容易污染没有模板的Mix、引物探针混合液和水，因此需要在专门的场地进行稀释。 |
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使用方法
样品RNA的制备
样品RNA的制备
1. 用自选方法纯化样品RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照（1×10E4拷贝/μL）加一定量的水充当，总体积必须跟核酸纯化试剂盒所要求的起始样品体积一样，NC用水替代。
3. N+2个样品的每个样品在纯化前，每个都要加入本试剂盒提供的10μL猪轮状病毒RT-LAMP内参（1×10E4拷贝/μL），相当于每个样品在进行核酸纯化前，含有1×10E5个拷贝的内参分子。
探针法荧光RT-LAMP反应20μL体系
4. 注意：第一次使用一个新的试剂盒时，必须先将100uL逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix（探针法，待加酶）中，盖上盖子后轻柔颠倒1分钟混匀，然后再取用。
5. 反应设置：如果有N+2个RNA纯化样品，则设置N+5个RT-LAMP扩增，增加一个阴性对照、一个内参扩增对照和一个阳性对照。
结果分析
1. 判断实验有效性：扩增阴性对照必须没有FAM信号的扩增（扩增是指Ct在40以内，荧光信号呈现标准的S型扩增曲线。任何一个不满足此两个条件，均判读为无扩增。下同），扩增阳性对照必须有FAM信号的扩增，否则整个实验无效，需要分析原因。扩增阴性对照如果有扩增，表示实验试剂或环境有模板DNA的污染。扩增阳性对照没有FAM信号的扩增表示试剂盒或扩增设备或操作有问题，需要分别排查。找到原因并解决问题后方可重启实验。
2. 如果实验有效，则可以分析N+2个样品的情况。
情况1、FAM信号有扩增，则此样品应判为阳性，不论HEX信号有无扩增。
情况2、样FAM信号无扩增，但HEX信号有扩增，则此样品应判为阴性；
情况3、FAM信号和HEX信号均无扩增，此样品应判为假阴性（可能原因之一是此样品中有抑制物，也可能核酸在纯化过程中丢失）。此样品需要稀释不同倍数后再测或/和重新进行核酸制备。
自备试剂
待测样品
待测样品
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年
低温运输，-20℃保存，有效期1年
