购物车
帮助
021-54845833/15800441009
人Y染色体探针法qPCR试剂盒
规格及成分
产品及特点
人Y染色体上95%是男性特异区域，里面含和男性有关的基因。本产品就是以其中一个基因为靶分子，设计的探针法荧光定量PCR产品，专门用于检测样品中是否有人Y染色体存在，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到10拷贝/反应。
3. 提供阳性对照，便于排除假阴性实验。
4. 能检测内源性内参基因（位于X染色体），便于排除假阴性样品。
5. 特异性高，引物是根据人Y染色体高度保守区设计，不会跟人的其他染色体的DNA发生交叉反应。
6. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量时其线性范围不少于5个数量级。
7. 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
8. 本产品只能用于科研。
规格及成分
|
成分 |
规格 |
包装 |
|
2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
|
荧光PCR专用模板稀释液 |
1mL |
1.5mL绿盖管 |
|
人Y染色体专一性引物-探针混合液（含内参） |
150μL |
0.5mL棕色管 |
|
人男性基因组DNA阳性对照(1×10E4拷贝/μL) |
50μL |
0.5mL黄盖管 |
|
KI多瘤病毒qPCR阳性对照(1E7拷贝/μL) |
50μL |
0.5mL白盖管 |
|
使用手册 |
1份 |
无 |
|
本产品采用5孔盒包装 |
||
使用方法
稀释标准曲线样品以10E0-10E4拷贝/μL这5个10倍稀释度为例
稀释标准曲线样品以10E0-10E4拷贝/μL这5个10倍稀释度为例
1. 标记4个离心管，分别为3，2，1，0。
2. 分别加入45μL 荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头（下同）。
3. 在3号管中加入5μL 1×10E4拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E3拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在2号管中加入5μL 1×10E3拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E2拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在1号管中加入5μL 1×10E2拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E1拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 换枪头，在0号管中加入5μL 1×10E1拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E0拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
7. 上面的操作得到0-3号标准曲线样品，将试剂盒提供的人男性基因组DNA阳性对照(1×10E4拷贝/μL)当成4号样品，共5个样品，放冰上待用。
样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，设置N+2个提�。喑龅囊桓鍪荘C（样品制备阳性对照，选用确定含Y染色体的样本），一个是NC（样品制备阴性对照，选用确定不含Y染色体的样本）。
9. 用自选方法纯化样品DNA，本产品跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。
Probe qPCR反应20μL体系，在样品制备室进行
10. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+8个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（本试剂盒提供的人女性DNA溶液），5个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（本试剂盒提供的人女性DNA溶液），1个用于PCR阳性对照（本试剂盒提供的人男性DNA阳性对照）。下面只以定量分析为例。
数据处理
1. 阴性阳性判断：没有Ct读数，或Ct大于45的PCR反应结果判为阴性。有Ct读数，Ct值小于45，荧光信号有对数增长，有典型倒S型扩增曲线的PCR反应结果判为阳性。每个PCR反应管需要同时对FAM通道和Cy5通道的结果分别进行判定，得到对应靶分子和内参的两个结果。
2. PCR实验有效性判断：如果样本制备阳性对照管或扩增阳性对照管FAM通道结果为阴性，则整个实验无效，不需要分析数据，需要分析原因，可能是操作、仪器和试剂三方面的原因，重做扩增或制备或跟仪器和试剂厂家联系。如果样本制备阴性对照管或扩增阴性对照管FAM通道结果为阳性，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析数据，需要分析失败原因，直到污染消除。如果上述阳性对照管和阴性对照管结果正常，则进入下一步。
3. 样本有效性判断：如果样本管FAM通道的结果为阳性，Cy5通道结果是阴性，则样本的阳性结果有效。如果样本管FAM通道和Cy5通道的结果均为阳性，并且FAM通道的Ct值小于Cy5通道的Ct值，则样本的阳性结果有效。如果FAM通道的Ct值大于Cy5通道的Ct值，则样本的阳性结果无效。如果样本管FAM通道和Cy5通道的结果均为阴性，则此样品管的阴性结果无效。可能原因是样本丢失或有抑制剂，需要用其所对应的样品重新提取核酸和进行PCR扩增。
4. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，分别以阳性对照FAM通道和内参Cy5通道的Ct值为纵轴，绘制标准曲线，阳性对照FAM通道读数的标准曲线为斜线，r2必须大于0.95。内参Cy5通道读数的标准曲线将跟FAM的标准曲线平行。再以待测样品的Ct值从阳性对照FAM通道读数的标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再换算成浓度X拷贝/反应。
5. 如果用于定性实验，对待测样品，如果其FAM通道的Ct没有读数、或Ct大于或等于45则均为阴性，如果小于45则为阳性。对任何FAM通道结果为阴性的待测样本，如果其对应的内参Cy5通道也为阴性，则此样品的阴性结果无效，此样品需要重复实验。
自备试剂
样品DNA
样品DNA
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年
低温运输，-20℃保存，有效期1年
