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副溶血弧菌tdh-tlh-trh三重探针法荧光定量PCR试剂盒
产品及特点
副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)属于弧菌科弧菌属，为革兰氏阴性菌，是一种嗜盐性细菌，广泛存在于海水、海底沉积物、海产动物（如鱼、虾、蟹、贝、海蜇等的体表或者肠道内）和盐分含量较高的腌制食品中（如咸菜、腌鱼等）。通过食用这些海鲜动物，副溶血弧菌可以进入食用者的体内，可引发急性肠胃炎、伤口感染和败血症，甚至导致感染者死亡。副溶血弧菌的主要致病因子是耐热直接溶血素(Thermostable Direct Hemolysin，TDH)、不耐热溶血素(Thermolabile Hemolisin，TLH)和耐热直接溶血素相关溶血素(Thermostable Direct Hemolysin-related Hemolysin，TRH)，分别由tdh、tlh和trh基因编码，因此，同时tdh、tlh和trh基因具有重要意义。本产品就是以探针法qPCR技术为基础开发的相关试剂盒，它具有下列特点：
产品及特点
副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)属于弧菌科弧菌属，为革兰氏阴性菌，是一种嗜盐性细菌，广泛存在于海水、海底沉积物、海产动物（如鱼、虾、蟹、贝、海蜇等的体表或者肠道内）和盐分含量较高的腌制食品中（如咸菜、腌鱼等）。通过食用这些海鲜动物，副溶血弧菌可以进入食用者的体内，可引发急性肠胃炎、伤口感染和败血症，甚至导致感染者死亡。副溶血弧菌的主要致病因子是耐热直接溶血素(Thermostable Direct Hemolysin，TDH)、不耐热溶血素(Thermolabile Hemolisin，TLH)和耐热直接溶血素相关溶血素(Thermostable Direct Hemolysin-related Hemolysin，TRH)，分别由tdh、tlh和trh基因编码，因此，同时tdh、tlh和trh基因具有重要意义。本产品就是以探针法qPCR技术为基础开发的相关试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
3. 提供阳性对照，便于排除假阴性结果。
4. 特异性高，引物和探针分别根据副溶血弧菌tdh、tlh和trh基因高度保守区设计，不会跟其他生物的DNA或副溶血弧菌的其他基因发生交叉反应。
5. 本产品只用于定性检测，不推荐用于定量检测。
6. tdh、tlh和trh基因分别用FAM、HEX和ROX标记的三个探针检测。
7. 本产品足够50次20μL体系的探针法qPCR反应。
8. 本产品只能用于科研。
规格及成分
规格及成分
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成分 |
规格 |
包装 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
500μL |
0.5mL红盖管 |
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荧光PCR专用模板稀释液 |
1mL |
1.5mL绿盖管 |
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副溶血弧菌tdh、tlh和trh基因三重PCR引物-探针干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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副溶血弧菌tdh基因阳性对照（1×10E4拷贝/μL） |
50μL |
0.5mL白色管 |
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副溶血弧菌trh基因阳性对照（1×10E4拷贝/μL） |
50μL |
0.5mL黄盖管 |
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使用手册 |
1份 |
无 |
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本产品采用十孔盒包装 |
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注 意：在使用前需要短暂离心引物-探针干粉管，然后在离心管中加入165 μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
样品DNA的制备
样品DNA的制备
1. 如果有N个样品，最好设置N+2个提�。喑龅囊桓鍪茄局票窹C（阳性对照），一个是样本制备NC（阴性对照）。可以用自备的、确定三个基因为阳性的样本作为样品制备PC。可以用自备的、确定是阴性的样本作为样品制备NC，可以用水替代。
2. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。
Probe PCR反应20μL体系，在样品制备室进行
3. 如果有N+2个核酸提�。蛏柚肗+6个PCR反应，多出的4个1个用于PCR NC，另外三个分别用于三个待检测基因的PCR PC。在标记管中按下表加入各成分本表只列出一次重复。
数据处理
4. 所有PC反应应该在对应的通道呈现阳性，如tdh PC应该为FAM通道阳性，tlh PC应该为HEX通道阳性。如果样本制备PC在其对应的通道为阴性，则整个样本制备实验无效。如果三个基因的PCR PC在其对应的通道为阴性（如tlh PC为HEX通道阴性），则整个PCR扩增实验无效。样本制备无效和扩增实验无效时均不需要分析数据，需要找到原因后再进行后续实验，可能原因包括操作失误、试剂变质或仪器故障。NC：样本制备NC和PCR NC应该在所有通道呈阴性。如果样本制备NC或PCR NC结果在任何通道为阳性，则整个样本制备和PCR扩增实验无效，不需要分析数据，需要找到原因后再进行后续实验。可能原因是环境污染。如果PC和NC均正常，则实验有效，可以对待测样本结果进行分析。
5. 样本结果分析：如果FAM通道、HEX通道和ROX通道的Ct大于或等于40，或者没有Ct值，则判为阴性。如果Ct小于40，并且荧光信号呈现倒S的典型扩增曲线，则判断为该通道对应的基因阳性。FAM通道阳性则表示含有tdh基因，HEX通道阳性则表示含有tlh基因，ROX通道阳性则表示含有trh基因。
自备试剂
样品DNA
样品DNA
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年
低温运输，-20℃保存，有效期1年
