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马疱疹病毒4型(Equine Herpesvirus Type 4，EHV-4)是一种双链DNA病毒，基因组长145 kb。EHV-4 经�：虴HV-1混合感染马属动物，引起发烧、厌食、鼻腔粘性脓性鼻液体，病变发生在呼吸道粘膜表面，还可涉及到肺部。由于EHV-4主要表现为呼吸道症状，在马匹运输过程中，EHV-4的接触性传播更为广泛，对马属动物产业造成了严重的经济损失，因此快速检测马疱疹病毒4型具有重要的意义。为此，本公司以探针法qPCR技术为基础开发了马疱疹病毒4型的检测试剂盒，它具有下列特点：
成分
规格
包装
2×Probe qPCR MasterMix
0.5mL
0.5mL本色管
荧光PCR专用模板稀释液
1mL
1.5mL绿盖管
超纯水
1mL
1.5mL蓝盖管
马疱疹病毒4型qPCR引物-探针干粉
50次
0.5mL棕色管
马疱疹病毒4型qPCR阳性对照(1E7拷贝/μL)
50μL
0.5mL黄盖管
使用手册
1份
无
本产品采用五孔盒包装
注 意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入165 μL的超纯水充分混匀后得到引物-探针混合液再使用，未用完的需要-20℃保存。
使用方法
稀释标准曲线样品以1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6、5、4、3、2、1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
3. 在6号管中加入5 μL 1E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在4号管中加入5 μL 1E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样品DNA的制备
7. 如果有N个样品，设置N+2个提�。喑龅囊桓鍪荘C（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10 μL上步所得第4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
Probe qPCR反应20 μL体系，在样品制备室进行
9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
样品DNA，超纯水，核酸纯化试剂盒
低温运输，-20℃保存，有效期1年
