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人类嗜T淋巴细胞病毒1型探针法qRT-PCR试剂盒
产品及特点
人类嗜T淋巴细胞病毒（human T-cell lymphotropic virus, HTLV）属逆转录病毒科的RNA肿瘤病毒亚科，分为HTLV I和HTLVⅡ两个亚型分别是引起成人T细胞白血病和淋巴瘤的病原体。HTLVⅠ可通过输血、注射或性接触等途径传播，也可经胎盘、产道或哺乳等垂直传播。目前，HTLV感染所引发的疾病尚无有效治疗手段，更缺乏预防性疫苗。因此快速检测HTLV I病毒具有重要的意义。本产品就是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的HTLV I病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒，它具有下列特点：
产品及特点
人类嗜T淋巴细胞病毒（human T-cell lymphotropic virus, HTLV）属逆转录病毒科的RNA肿瘤病毒亚科，分为HTLV I和HTLVⅡ两个亚型分别是引起成人T细胞白血病和淋巴瘤的病原体。HTLVⅠ可通过输血、注射或性接触等途径传播，也可经胎盘、产道或哺乳等垂直传播。目前，HTLV感染所引发的疾病尚无有效治疗手段，更缺乏预防性疫苗。因此快速检测HTLV I病毒具有重要的意义。本产品就是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的HTLV I病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据人类嗜T淋巴细胞病毒I型RNA高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。
6. 本产品足够50次20 μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应。
7. 本产品只能用于科研。
规格及成分
使用方法
稀释标准曲线样品以1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
规格及成分
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成分 |
规格 |
包装 |
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探针法qRT-PCR缓冲液 |
500μL |
0.5mL蓝盖管 |
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探针法qRT-PCR酶混合液v2 |
50μL |
0.5mL红盖管 |
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荧光PCR专用模板稀释液 |
1mL |
1.5mL绿盖管 |
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人类嗜T淋巴细胞病毒I型qRT-PCR引物-探针干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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人类嗜T淋巴细胞病毒I型qRT-PCR阳性对照(1E7拷贝/μL) |
50μL |
0.5mL黄盖管 |
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使用手册 |
1份 |
1份 |
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本产品采用五孔盒包装 |
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注 意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162 μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀释标准曲线样品以1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6、5、4、3、2、1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光RT-PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同。
3. 在6号管中加入5 μL 1E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在4号管中加入5 μL 1E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样品DNA的制备
7. 如果有N个样品，设置N+2个提�。喑龅氖荘C（样品制备阳性对照）和NC（样品制备阴性对照）。可以取上步所得的第4号稀释液10 μL再加上一定量的水，使总体积与核酸纯化试剂盒所要求的起始样品体积一致，以此作为PC。另外用水作为NC。
8. 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
Probe qRT-PCR反应20 μL体系，在样品制备室进行
9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），1个用于RT-PCR阳性对照（用第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
数据处理
1. 如果样本制备阳性对照或PCR阳性对照(包括标曲样本)结果为阴性，则整个实验无效，不需要分析数据，需要重新样本制备，重新进行PCR扩增或跟厂家联系。如果样本制备阴性对照或PCR阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系。
2. 如果阴性对照和阳性对照均正常，则实验有效，可以进入后续分析。
3. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
4. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须没有Ct，或者Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于40。对待测样品，如果其Ct小于40则为阳性，如果没有Ct，或者Ct大于或等于40则为阴性。
自备试剂
样品RNA
样品RNA
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期2年
低温运输，-20℃保存，有效期2年
